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FUJIFILM Wako和光純藥質(zhì)譜級(jí)賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶

質(zhì)譜級(jí)賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶

Lysyl Endopeptidase

本產(chǎn)品是質(zhì)譜分析前處理時(shí)最常用的蛋白分解酶即賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶，該酶可以特異性切除賴(lài)氨酸基團(tuán)C末端的多肽，可用于蛋白測(cè)序分析和Lys-X化合物的酶合成。若同時(shí)使用賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶和胰酶，可更好地切斷賴(lài)氨酸基團(tuán)的多肽，增加多肽的數(shù)量。產(chǎn)品已按照使用習(xí)慣做成小包裝，是方便使用的冷凍干燥品。

來(lái)源：細(xì)菌

外觀(guān)：凍干粉（包含2 mmol/L Tris-HCl緩沖液，pH 8）

活性：0.03～0.07 AU/vial

分子量：27,000(瓊脂糖過(guò)濾)，30,000（SDS-PAGE）

溶解性：溶于水或緩沖液

穩(wěn)定性：溶解于pH值5.0-12.0的Tris緩沖液中，可在4℃穩(wěn)定保存2年；在pH值6.0-11.0 30℃時(shí)能穩(wěn)定保存，但溫度超過(guò)50℃時(shí)不穩(wěn)定。

最適pH值：9.0~9.5

等電點(diǎn)：6.9~7.0

底物特異性：

可水解底物——Tos-Lys-OMe,Bz-Lys-NH₂,Bz-Lys-pNA,Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH₂,Bz-Arg-pNA,Arg-pNA

抑制劑：DFP，PMSF，TLCK

◆特點(diǎn)

● 高特異性、高蛋白質(zhì)消化率、適用于蛋白質(zhì)譜分析

● 提高裂解效率、增加肽段數(shù)量

● 根據(jù)使用量特意制備小包裝，方便使用

◆應(yīng)用

分別采用胰蛋白酶(Tp)、賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶 (Lys-C) 和Tp與Lys-C聯(lián)用進(jìn)行膠內(nèi)酶切的效果比較。

牛血清蛋白BSA 的條帶(100 ng) 通過(guò)SDS-PAGE 獲得，然后分別用Tp、Lys-C和Lys-C+Tp進(jìn)行酶切，再用MALDI-TOFMS法進(jìn)行分析。

這些蛋白酶的實(shí)驗(yàn)效果見(jiàn)下表。

表 1：Tp、Lys-C和Lys-C+Tp的結(jié)果對(duì)照

這些結(jié)果表明Lys-C酶解的錯(cuò)誤裂解率最低。Tp酶解時(shí)加入Lys-C后，錯(cuò)誤裂解率有所降低，同時(shí)，可以鑒定出更多的多肽。

胰蛋白酶 (Tp)( 圖 a) 和賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶 (Lys-C)+Tp ( 圖 b) 酶切后的質(zhì)譜結(jié)果對(duì)照?qǐng)D。

Lys-C+Tp酶切后，可以在m/z=2000時(shí)得到吸收峰，而單獨(dú)的Tp酶切在m/z=2000時(shí)沒(méi)有吸收峰。該結(jié)果表明Lys-C可以提高測(cè)序覆蓋度。

( 數(shù)據(jù)由大阪醫(yī)療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada博士提供 )

◆賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶

賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶，最初由Masaki 等人從土壤細(xì)菌中分離得到。該酶可以特異性剪切賴(lài)氨酸殘基C 末端和S-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵，用于蛋白測(cè)序和Lys-X化合物的酶催化合成。該酶穩(wěn)定性高，在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小時(shí)之后，仍然擁有完整的生物活性。

◆產(chǎn)品列表

品牌	編號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	規(guī)格	產(chǎn)品等級(jí)
FUJIFILM Wako	125-05061	賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶，MS級(jí)	20 μg×5	質(zhì)譜級(jí)