產(chǎn)品說(shuō)明：

     伊文斯藍(lán)(Evans Blue)又稱偶氮藍(lán)。伊文斯藍(lán)與臺(tái)盼藍(lán)都是細(xì)胞活性染料，常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的 完整性和細(xì)胞是否存活。活細(xì)胞因有外排功能而無(wú)法被伊文斯藍(lán)染成藍(lán)色，而死細(xì)胞會(huì)被染成淡藍(lán) 色。因此可以通過(guò)此方法在顯微鏡下區(qū)分死細(xì)胞與活細(xì)胞，但無(wú)法區(qū)分死亡與壞死。

操作說(shuō)明：（僅供參考）

(一)血腦屏障通透性

1、取處理后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(以小鼠為例)，靜脈注射 Evans Blue Stain (0.5%)，小鼠眼睛、皮膚出現(xiàn)藍(lán)色。0.5～1h 后處死小鼠，取目的腦組織。 

2、腦組織置于 1.5ml 離心管中，加入 1ml PBS， 迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿, 離心。 

3、取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育。該步驟亦可采用如下操作: 取上清，按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮，室溫孵育 24h。 

4、離心 15min。

5、取上述溶液，用分光光度計(jì)測(cè) 620 nm 處吸光值(OD 值)。同時(shí)測(cè)定已知不同梯度的標(biāo)準(zhǔn)依文思藍(lán)的 OD 值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)樣品的伊文斯蘭含量。

(二)活細(xì)胞染色 

1、取 100μl 重懸細(xì)胞到常規(guī)離心管內(nèi)，入 100μl Evans Blue Stain 輕輕混勻染色(染色時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)，但不宜超過(guò)10min)。

2、吸取少量經(jīng)過(guò)染色后的細(xì)胞，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。通常如果要比較精確地進(jìn)行定量，每個(gè)細(xì)胞樣品至少數(shù) 500 個(gè)細(xì)胞，數(shù)出藍(lán)色細(xì)胞和細(xì)胞總數(shù)。細(xì)胞存活率計(jì)算公式如下：細(xì)胞存活率＝(細(xì)胞總數(shù)－藍(lán)色細(xì)胞數(shù))/細(xì)胞總數(shù)×100%

注意事項(xiàng)： 

1、Evans Blue Stain 對(duì)人體有輕微毒性，請(qǐng)小心防護(hù)。 

2、細(xì)胞染色時(shí)，注意凋亡小體偶爾也有拒染現(xiàn)象。 

3、血腦屏障通透性實(shí)驗(yàn)中，Evans Blue Stain 注射量應(yīng)根據(jù)不同動(dòng)物以及動(dòng)物的重量調(diào)整。 

4、最好采用低溫冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心。 

5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。